一、收到原代培養的細胞后應該有哪些注意事項？

顯微鏡下觀察細胞狀態，看是否有細胞脫落、漏液和污染等異常情況，然后仔細閱讀產品說明書，因不同品牌、不同種屬、不同類型的細胞其培養技巧存在些許差別，戶收到細胞后，請務必仔細閱讀隨貨附贈的說明書，切記不可僅憑經驗操作。

通常，我們可以從說明書中獲取以下重要信息：

（1）細胞數目

（2）細胞增殖能力

（3）推薦培養基、培養器皿及包被液

（4）推薦接種密度

（5）復蘇、培養、傳代等操作步驟

（6）運輸、儲存及培養條件

二、細胞培養操作說明

收貨處理

1. 貼壁細胞

發貨形式：T25方瓶、凍存管

1. 1) 收到T25方瓶細胞后，拆開T25方瓶的自封袋，不拆封口膜，表面噴75%酒精后請在顯微鏡下確認細胞生長狀態（可以拍下此時細胞照片）。去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，然后再處理細胞。首先將T25方瓶中的培養基取出裝在兩個50ml離心管中備用，然后消化傳代。檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們（凍存管細胞收到后直接37℃水浴復蘇或直接放置于液氮中長期儲存）。

2. 2) 凍存管細胞，收到細胞后按照細胞復蘇的步驟操作即可。

2、懸浮細胞

收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將細胞置于中37培養箱℃平衡約2-3h。然后，1200rpm離心5min，棄去15ml離心管中的培養基，細胞沉淀用新鮮的完全培養基重懸并培養。

細胞的培養及傳代

1、細胞培養

正確的培養基90%；優質胎牛血清10%。

培養條件： 溫度37℃，CO2，5%。，培養箱濕度為70%-80%。極少部分細胞培養條件不一致，請仔細閱讀對應的細胞說明書，使用正確的培養方式。

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

2、細胞傳代

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代。

1.  貼壁細胞的傳代

（1） 棄去培養瓶中的培養基，用不含鈣、鎂離子的PBS浸洗皿/瓶底所有部位的細胞1-2次。

（2） 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，輕輕晃動培養瓶，置于37℃培養箱中消化2-3分鐘。

（3） 2-3分鐘后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。若細胞仍在貼壁，放回培養箱中繼續消化至細胞大部分變圓脫落為止。

（4） 輕輕吹打培養瓶底，然后將瓶中的培養基吸出，移入15ml離心管中，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。

（5） 均分到幾個到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中，放回培養箱培養。

細胞凍存

細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-4步驟進行，最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

細胞復蘇：

1）將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍融化。

2）移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基重懸細胞。

3）將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中入培養箱培養。第二天換液并檢查細胞密度。

三、原代細胞的傳代周期和傳代次數怎樣確定？

原代細胞一般是采用“倍增次數”來描述細胞生長潛能的，一次細胞倍增是指細胞總數增長為原來的2倍，一次傳代通常是指將一瓶細胞擴增至2-3瓶。由于不同物種、組織來源、細胞類型和體外培養條件等因素的影響，原代細胞“倍增次數”可能會有很大差異，所以對某些原代細胞的傳代周期和傳代次數需進行具體分析。

四、欣潤生物的原代細胞，是否需要特定的包被液包被培養瓶/皿？

欣潤生物的大多數細胞可以在不使用包被液的情況下自行貼壁。然而仍有部分細胞類型需要使用指定的包被材料。具體情況請參見說明書中相應部分的內容。

五、如何計算大鼠胰島的IEQ值？

一般情況下,直徑大小為150um 的胰島細胞 = 1 IEQ.

胰島 IEQ 對照表：

顯微鏡下記錄細胞大小和數量后，請按以上對照表計算，再乘以稀釋倍數就是總的IEQ值。

例如：您從3ml細胞懸液中取出50ul，觀察計數后得出：

        50-100 um 有5個胰島

        101-150 um 有3個胰島

        151-200 um 有2個胰島

        201-250 um 有4個胰島

那么總的IEQ值=60×（0.17×5+0.67×3+1.7×2+3.5×4）=1215.6 IEQ